Technische Universiteit Delft
Promotie: Mirage
door M&C
Promotie van Mevrouw A.M. Sevcenco: "The MIRAGE method of
metalloproteomics"
10 januari 2011 | 15:00 uur
plaats: Aula TU Delft
Mevrouw A.M. Sevcenco | Masters of Biotechnology, Nederland
promotor | Prof.dr. W.R. Hagen TNW
coprom. | Dr. P.L. Hagedoorn UD-TNW
The MIRAGE method of metalloproteomics
Metaalionen spelen een belangrijke rol in biologische systemen; geschat
wordt dat ongeveer een derde van alle eiwitten een metaalâcofactor
bevat. Een aantal belangrijke doorbraken op het gebied van
metalloâenzymen hebben plaatsgevonden in de laatste decennia, en met
name op het gebied van de drieâdimensionale structuren van
metalloâeiwitten en de functies van metaalbindingsplaatsen. Toch is het
nog steeds zeer moeilijk om metaalâbevattende eiwitten globaal te
lokaliseren, identificeren en kwantificeren in een bepaald organisme.
Vanwege de ingewikkelde samenstelling van biologische monsters is het
gebruik van hoge resolutie scheidingstechnieken naast zeer gevoelige
metaalanalyse en kwantificatie noodzakelijk. Metal Isotope native
RadioAutography in Gel Electrophoresis (MIRAGE) technologie is
ontwikkeld om natieve eiwitten die een bepaald metaalion bevatten te
scheiden en kwantificeren in een bepaald cellulair systeem. Het
protocol voor MIRAGE bevat vier stappen: (1) het merken van eiwitten
met een geschikt kortlevend radioisotoop (bijv. Mn, Fe, Cu, Ni, Zn, Mo,
W); (2) scheiden van intacte oplosbare holoâeiwitten met natieve
isoelectric focussing (IEF) gecombineerd met blue native polyacrylamide
gel electrophoresis (BNâPAGE) in natiefânatief 2D gel elektroforese;
(3) visualiseren van de âspotsâ en kwantificeren met autoradiografie;
en (4) eiwitidentificatie met massaspectrometrie. MIRAGE experimenten
met behulp van biologisch relevante metaalâisotopen (^59Fe, ^64Cu,
^69Zn, ^99Mo en ^187W) zijn op model organismen uitgevoerd: wildâtype
Escherichia coli K12 en de hyperthermofiele archaeaon Pyrococcus
furiosus.
Meer informatie?
Voor inzage in proefschriften van de promovendi kunt u kijken in de TU
Delft Repository op: repository.tudelft.nl. TU Delft Repository is de
digitale vindplaats van openbare publicaties van de TU Delft.
Proefschriften zullen binnen een paar weken na de desbetreffende
promotie in de Repository te vinden zijn.